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可見分光光度計樣品分析方法及操作指南
一、樣品分析方法
1. ?標準曲線法?
?標準溶液配制?:配制5-8個不同濃度的標準溶液(濃度范圍需覆蓋待測樣品預期值),按梯度稀釋并貼標防止混淆?。
?顯色處理?:部分樣品需加入顯色劑(如總磷檢測需鉬酸銨顯色)后靜置至反應?。
?吸光度測定?:在特征吸收波長下(如總磷檢測用697nm)測量標準溶液吸光度,繪制濃度-吸光度標準曲線?。
2. ?直接比較法?
?單點校準?:適用于已知線性關系的樣品,用單一標準溶液計算樣品濃度(公式:
?樣=?樣?標×?標C 樣 = A 標A 樣×C 標)?。
二、操作流程
1. ?實驗準備?
?儀器檢查?:確認分光光度計處于穩定環境(溫度15-30℃,濕度≤70%),清潔樣品室及比色皿?。
?試劑準備?:配制空白溶液(如蒸餾水或溶劑)及待測樣品,確保無懸浮物?。
2. ?儀器校準與參數設置?
?開機預熱?:接通電源后預熱≥10分鐘(部分型號需30分鐘),避免基線漂移?。
?波長設定?:通過控制面板輸入特征波長(如總磷用697nm)或按<GOTO λ>鍵直接跳轉?。
?基線校正?:放入空白溶液,按<AUTO-ZERO>或<ABS%>鍵調零?。
3. ?樣品檢測?
?裝樣要求?:液體樣品需澄清(必要時過濾),裝入比色皿至3/4高度,外壁用擦鏡紙清潔?。
?測量步驟?:
將空白溶液放入光路,按<100%T>鍵調滿度?。
依次放入標準溶液和待測樣品,記錄吸光度值(按<START/STOP>鍵讀數)?。
?重復測量?:每個樣品至少測3次,取平均值以提高精度?。
4. ?數據分析?
?標準曲線擬合?:使用儀器軟件或手動計算線性回歸方程(y=kx+b),計算樣品濃度?。
?結果驗證?:通過加標回收率或平行樣檢測驗證數據可靠性?。
三、關鍵注意事項
?波長準確性?:定期用標準濾光片(如鈥玻璃)校準波長,誤差需≤±1nm?17。
?比色皿使用?:
玻璃比色皿僅適用于可見光區(350-1000nm),使用前后用乙醇清洗?。
避免用手直接接觸光面,防止指紋影響透光率?。
?干擾排除?:
渾濁樣品需離心或過濾,避免懸浮物散射光?。
共存物質干擾可通過雙波長法或背景扣除消除?。
四、故障處理
?問題 | ?解決方法 |
吸光度讀數不穩定 | 檢查電源穩定性,延長預熱時間;清潔比色 |
基線無法調零 | 更換空白溶液或檢查光路遮擋 |
透射比超100% | 透射比超100% |
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